一、先討論“堵”的情況。
“堵”的表現現象是柱壓異常升高,直接原因是流路不暢。堵塞的主要位置是在色譜柱的前端,主要原因是流動相里有雜質,雜質的主要來源是細菌。
1、“堵”的原因:配制流動相時細菌污染。
首先,我們要認識到,一般的國產甲醇其實不需要額外過濾處理,直接使用沒有問題。即使是有些固態微粒雜質,也能在液相流路系統前端的過濾頭上排除,真正容易引起問題的,是水中的細菌。
新制備的純水在室內放置幾天會長菌,而這些細菌雖然肉眼不可見,卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,造成柱子很快報廢。這是在配制流動相時造成的細菌污染的原因,解決它的方法很簡單,確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦:
(1)理想的方式當然是購買實驗室純水機,既方便又可靠,質量也放心。缺點是價格不菲。
(2)成箱購買市售品牌純凈水,如,500mL一支的怡寶或娃哈哈,這些水的質量足以應付液相色譜的要求。先隨機抽取一支做一下細菌平板實驗,待菌落數合格方可使用。這樣每次只要單獨開一支即可,也很方便。每次成本2元左右。
這里特別指出一個細節:在絕大多數書本上,凡談到配制流動相都會談到后面有一個過濾的步驟。但是從我們長期使用的實際效果來說,只要能保證水的質量,這一步*可以也應當去除。
原因有以下三點:
(1)流動相過濾在理論上有好處,但是,實際操作時由于不可能做到專瓶,反而容易造成的交叉污染,對于配比復雜的流動相影響更大。
(2)流動相過濾在經濟成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元,且過濾器*是比較容易損壞的設備。主要是過濾片的成本太高,一片要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計算,過濾片的成本會遠遠高于色譜柱的成本。
(3)流動相過濾對于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個預清洗、裝備、使用、用后清洗,晾干的過程,至少也有一個小時的時間。這個成本也不能忽視。
(4)在實際工作未發現流動相不過濾會對柱壽命有任何影響。我們起碼有6年時間沒有做過流動相過濾的工作,但是和國內同行相比較,在同等使用強度下我們的柱壽命是比較長的。
2、“堵”的原因:使用流動相時的細菌污染。
指的是:
流動相剛開始沒有長菌,在使用時卻產生了細菌污染。這主要是在使用制備液相色譜儀時的一種不良使用習慣造成的。
3、“堵”的原因:不適當操作。
常見問題的有以下幾種:
(1)在更換零件時選擇的型號有誤,接口不是很匹配,在擰緊的時候產生變形而使得管路堵塞。
(2)樣品處理液凈化得不干凈,長期會在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。
(3)在使用手動六通閥時,有些人可能由于手勁小的原因,轉動的不到位,于是造成流路形成了死堵,壓力快速升高超過警戒值。
(4)在使用金屬管路作出廢液管時,應當注意先在廢液瓶中放一些水,并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實驗使用較高濃度的緩沖鹽溶液,在停機時可能在出口端結晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見,但卻的確發生過。
以上便是今天關于討論下制備液相色譜儀出現“堵”“漏”怎么辦的全部分享了,希望對大家今后使用本設備能有幫助。