制備液相流動(dòng)相通過高壓泵進(jìn)入系統(tǒng),樣品溶液通過注射器進(jìn)入流動(dòng)相,流動(dòng)相加載到色譜柱(固定相)中。由于樣品溶液中各組分在兩相中的分配系數(shù)不同,經(jīng)過兩相反復(fù)吸附-解吸分配后,各組分的運(yùn)動(dòng)速度有很大的不同。它被分離成一個(gè)單獨(dú)的組件,然后依次從列中流出。當(dāng)樣品濃度通過檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)并傳送給記錄器,數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。
制備液相溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過固定相時(shí),由于與固定相發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同,在固定相中滯留時(shí)間不同,從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。
液相色譜是現(xiàn)在食品實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用非常廣泛的一款儀器,但是還有很多小伙伴對(duì)它的原理、使用維護(hù)等知識(shí)不太了解。今天小編就從HPLC概述、工作原理、結(jié)構(gòu)組成、常見故障及維護(hù)、HPLC應(yīng)用等方面來(lái)給大家科普下HPLC的基礎(chǔ)知識(shí)。
色譜圖其實(shí)簡(jiǎn)單地講是一個(gè)橫坐標(biāo)是時(shí)間縱坐標(biāo)是電信號(hào)的二維圖譜。液相色譜法,你可以簡(jiǎn)單地想象,固定相是一個(gè)多空海綿狀的柱形結(jié)構(gòu),樣品在孔洞中進(jìn)進(jìn)出出。因?yàn)楦鱾€(gè)物質(zhì)的吸附能力不同,所以才會(huì)在色譜圖中拉開距離。
對(duì)于樣品污染沉積,先用40~50度的純水,低速正向沖洗柱子待柱壓逐漸下降后,相應(yīng)的提高流速?zèng)_洗柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘,對(duì)于第2種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品的污染情況而定),在用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,然后甲醇沖洗,正向沖洗柱子30分鐘以上。